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（1）选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

（2）新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量*过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

（3）平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至zui低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法*时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。

（4）当浓缩到剩下1ml时，取50ul缓冲溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的缓冲溶液，直到蛋白不发生沉淀为止。

（5）前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再 浓缩至1ml左右，连续三次，zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。

离心浓缩管

pall离心浓缩管可以有效简化核酸与蛋白的常规处理程序。只需几分钟，这些离心管就可以对从50ul到60ml的样品进行的浓缩和脱盐。它可选配多种膜，确保低非特异性生物分子吸附和稳定的高回收率，回收率通常超过90%。

1、三种常用的应用：

●浓缩——采用超滤的方法浓缩稀释的蛋白或DNA/RNA样品溶液是十分便捷的

●脱盐和缓冲液交换（洗滤）——超滤为去除和更好溶液中的盐、去除变性剂、分离复合分子、去除低分子量物质或者快速改变离子或者pH环境提供了方便而的方法。

●分离-超滤无法*分离两种分子量近似的分子。为有效分离，被分离分子的分子量差别至少要达到一个数量级（10X）。使用超滤进行分离非常，比如制备无蛋白的滤液，从DNA和蛋白样品上分离游离状态或者未混合的标记物，纯化PCR合成反应的产品。

2、与非膜工艺（层析、透析、溶剂萃取或者离心）相比，超滤具有以下优点：

●对于被处理的分子更加温和

●不需要有机萃取，也就不会导致蛋白变性

●维持了离子和pH条件

●更快，更便宜

●可以在低温下进行处理（比如在冷藏室中）

●，可以同时对分子进行浓缩和纯化

3、基于不同处理量的产品的选型