色谱柱的使用说明：
（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：
流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并*置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：
样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：
使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：
如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂*或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度是室温。
3、色谱柱的再生
因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
4、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
色谱柱在使用中zui常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：
（1）色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
（2）色谱柱头的填料被样品污染；
（3）色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；
（4）流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：
（1）如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
（2）如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3）如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4）如果因PH值使用不当，很难恢复。
一、色谱柱的使用
反相色谱柱一般是保存在甲醇或乙腈中。使用前一定注意所使用的流动相和甲醇或乙腈能够互溶。色谱柱在保存过程中有可能因为溶剂的挥发而干涸，所以在使用流动相分析之前应使用10—20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。如果所使用的流动相中含有缓冲盐，则应注意用水作为过渡，而不能直接将有机溶剂和缓冲盐直接混合。测试结束后冲洗柱子也要注意这一点。还有一点需要注意的是不要使用纯水冲洗色谱柱。对于非极性柱，比如C8和C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时由于纯水不能浸润填料表面形成水膜，出现样品不保留而使分离度下降，重复性差，所以对于一般的C8和C18柱，有机溶剂的比例不应低于5%。
二、色谱柱的再生
再生过程中用来冲洗色谱柱的溶剂体积可以参照下表：
再生过程及溶剂冲洗顺序可参见下表：
三、色谱柱的维护
1.尽量能够使用预柱或保护柱保护色谱柱；
2.大多数色谱柱的PH范围是2—8，尽量不要超过范围使用；
3.避免流动相的组成或比例急剧变化；
4.流动相使用前必须进行过滤和脱气处理；
5.如果使用极性或粒子性的缓冲液作流动相，实验完毕后应将色谱柱冲洗干净
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱体积的溶剂清洗：（正向冲洗时流速：0.5ml/min）
95%水：5%乙腈(或甲醇)
（去除缓冲盐）
如系统没有梯度功能中间增加5倍柱体积50%水：50%乙腈（或甲醇）冲洗步骤。
95% 乙腈（或甲醇）：5%水
zui后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。
如是Phenomenex柱子可以反冲，但流速一点要控制在0.2ml/min之内。
如还有疑问，可以发邮件给我，ydfq-0013
你问的不是C18的冲洗吗？那个二氯甲烷是冲洗正相硅胶柱的，也就是（silica柱子的）。
一、反相柱子的再生
顺次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90（V/V），已腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
液相色谱HPLC保留时间漂移的故障排除
保留时间不重现有两种不同的情况：即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。保留时间漂移的几种zui常见的原因如下:
一 色谱柱平衡
如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相*平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。
流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。
二 固定相稳定性
固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。
三 色谱柱污染
保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。
样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。
避免色谱柱污染zui简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。
使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
四 流动相组成
流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。
五 疏水坍塌
当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或*不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱或非端基封口的色谱柱也可避免发生坍塌
